Is e cromatagrafaidheachd leaghan am prìomh dhòigh air susbaint gach pàirt a dhearbhadh agus neo-chunbhalachd ann an stuthan amh, eadar-mheadhanach, ullachadh agus stuthan pacaidh, ach chan eil dòighean àbhaisteach aig mòran de stuthan airson a bhith an urra, agus mar sin tha e do-sheachanta dòighean ùra a leasachadh. Ann a bhith a’ leasachadh dhòighean ìre liùlach, tha an colbh cromatagrafach aig cridhe cromatagrafaidheachd liùlach, agus mar sin tha e deatamach gun tèid colbh cromatagrafach iomchaidh a thaghadh. San artaigil seo, mìnichidh an t-ùghdar mar a roghnaicheas tu colbh cromatagrafaidheachd liùlach bho thrì taobhan: beachdan iomlan, beachdachadh agus farsaingeachd tagraidh.
A. Beachdan iomlan airson colbhan cromatagrafaidheachd liùlach a thaghadh
1. Dèan measadh air feartan fiosaigeach agus ceimigeach an anailit: leithid structar ceimigeach, solubility, seasmhachd (leithid a bheil e furasta a bhith air a oxidachadh / air a lùghdachadh / air a uisgeachadh), searbhachd agus alkalinity, msaa, gu h-àraidh is e structar ceimigeach an iuchair feart ann a bhith a’ dearbhadh na feartan, leithid a’ bhuidheann conjugated tha sùghadh ultraviolet làidir agus fluorescence làidir;
2. Obraich a-mach adhbhar an sgrùdaidh: a bheil feum air dealachadh àrd, èifeachdas colbh àrd, ùine sgrùdaidh goirid, cugallachd àrd, strì an aghaidh cuideam àrd, beatha colbh fada, cosgais ìosal, msaa;
- Tagh colbh cromatagrafach iomchaidh: tuig co-dhèanamh, feartan fiosaigeach agus ceimigeach an inneal-lìonaidh cromatagrafach, leithid meud gràin, meud pore, fulangas teòthachd, fulangas pH, asorption an anailit, msaa.
- Beachdachaidhean airson colbhan cromatagrafaidheachd liùlach a thaghadh
Bruidhnidh a’ chaibideil seo air na nithean air am feumar beachdachadh nuair a thathar a’ taghadh colbh cromatagrafaidheachd bho shealladh feartan fiosaigeach is ceimigeach a’ cholbh chromatography fhèin. 2.1 Matrix lìonaidh
2.1.1 Matrix gel silica Is e silica gel am matrix lìonaidh anns a’ mhòr-chuid de cholbhan cromatagrafaidheachd liùlach. Tha purrachd àrd, cosgais ìosal, neart meacanaigeach àrd aig an seòrsa lìonaidh seo, agus tha e furasta buidhnean atharrachadh (leithid ceangal phenyl, ceangal amino, ceangal cyano, msaa), ach tha an luach pH agus an raon teòthachd a tha e a’ gabhail ris cuingealaichte: an Is e an raon pH den mhòr-chuid de luchd-lìonaidh silica gel matrix 2 gu 8, ach faodaidh an raon pH de ìrean ceangail silica gel a chaidh atharrachadh gu sònraichte a bhith cho farsaing ri 1.5 gu 10, agus tha ìrean ceangail silica gel sònraichte ann cuideachd a tha seasmhach aig pH ìosal, leithid Agilent ZORBAX RRHD stablebond-C18, a tha seasmhach aig pH 1 gu 8; mar as trice tha crìoch teòthachd àrd na matrix gel silica 60 ℃, agus faodaidh cuid de cholbhan cromatagrafaidheachd teòthachd 40 ℃ fhulang aig pH àrd.
2.1.2 Polymer matrix Is e polystyrene-divinylbenzene no polymethacrylate a th’ ann an lìonaichean polymer sa mhòr-chuid. Is e na buannachdan aca gun urrainn dhaibh raon pH farsaing fhulang - faodar an cleachdadh anns an raon de 1 gu 14, agus tha iad nas seasmhaiche ri teòthachd àrd (faodaidh iad ruighinn os cionn 80 ° C). An coimeas ri lìonaichean C18 stèidhichte air silica, tha hydrophobicity nas làidire aig an seòrsa lìonaidh seo, agus tha am polymer macroporous gu math èifeachdach ann a bhith a ’sgaradh sampallan leithid pròtainean. Is e na h-eas-bhuannachdan a th’ ann gu bheil èifeachdas a’ cholbh nas ìsle agus gu bheil an neart meacanaigeach nas laige na an luchd-lìonaidh stèidhichte air silica. 2.2 Cruth Particle
Tha a’ mhòr-chuid de lìonaichean HPLC an latha an-diugh nam mìrean spherical, ach uaireannan tha iad nam mìrean neo-riaghailteach. Faodaidh mìrean spherical cuideam colbh nas ìsle a thoirt seachad, èifeachdas colbh nas àirde, seasmhachd agus beatha nas fhaide; nuair a bhios tu a’ cleachdadh ìrean gluasadach àrd-slaodachd (leithid searbhag fosphoric) no nuair a tha am fuasgladh sampall slaodach, tha farsaingeachd uachdar sònraichte nas motha aig gràinean neo-riaghailteach, a tha nas freagarraiche airson làn ghnìomhachd an dà ìre, agus tha a’ phrìs gu math ìosal. 2.3 Particle meud
Mar as lugha am meud gràin, is ann as àirde an èifeachdas colbh agus mar as àirde an dealachadh, ach mar as miosa an aghaidh cuideam àrd. Is e an colbh as cumanta an colbh meud gràin 5 μm; ma tha an riatanas dealachaidh àrd, faodar inneal-lìonaidh 1.5-3 μm a thaghadh, a tha cuideachail airson fuasgladh fhaighinn air duilgheadas dealachaidh cuid de shampaill ioma-fhillte agus ioma-phàirt. Faodaidh UPLC lìonaichean 1.5 μm a chleachdadh; Bithear a’ cleachdadh lìonaichean meud gràin 10 μm no nas motha gu tric airson colbhan leth-ullachaidh no ullachaidh. 2.4 Carbon susbaint
Tha susbaint gualain a’ toirt iomradh air a’ chuibhreann de ìre bannaichte air uachdar gel silica, a tha co-cheangailte ri farsaingeachd uachdar sònraichte agus còmhdach ìre bannaichte. Tha susbaint àrd gualain a 'toirt seachad comas colbh àrd agus fuasgladh àrd, agus gu tric bidh e air a chleachdadh airson sampallan iom-fhillte a dh' fheumas sgaradh àrd, ach air sgàth an ùine eadar-obrachaidh fada eadar an dà ìre, tha an ùine sgrùdaidh fada; tha ùine sgrùdaidh nas giorra aig colbhan cromatagrafach susbaint gualain ìosal agus faodaidh iad taghadh eadar-dhealaichte a nochdadh, agus gu tric bidh iad air an cleachdadh airson sampallan sìmplidh a dh’ fheumas mion-sgrùdadh luath agus sampaill a dh ’fheumas suidheachaidhean ìre àrd uisgeach. San fharsaingeachd, tha susbaint gualain C18 eadar 7% agus 19%. 2.5 Meud pore agus farsaingeachd uachdar sònraichte
Tha meadhanan sùghaidh HPLC nam mìrean porous, agus bidh a ’mhòr-chuid de eadar-obrachaidhean a’ tachairt anns na pores. Mar sin, feumaidh moileciuilean a dhol a-steach do na pores gus a bhith air an adsorbed agus air an sgaradh.
Tha meud pore agus farsaingeachd uachdar sònraichte nan dà bhun-bheachd taiceil. Tha meud pore beag a’ ciallachadh farsaingeachd uachdar sònraichte, agus a chaochladh. Faodaidh raon uachdar sònraichte mòr an eadar-obrachadh eadar moileciuilean sampall agus ìrean bannaichte àrdachadh, gleidheadh àrdachadh, luchdachadh sampall àrdachadh agus comas colbhan, agus sgaradh phàirtean iom-fhillte. Buinidh lìonaichean làn porous don t-seòrsa lìonadh seo. Dhaibhsan le riatanasan dealachaidh àrd, thathas a’ moladh lìonaichean a thaghadh le farsaingeachd uachdar sònraichte; faodaidh raon uachdar sònraichte beag cuideam cùil a lughdachadh, èifeachdas colbh adhartachadh, agus ùine cothromachaidh a lughdachadh, a tha freagarrach airson mion-sgrùdadh caisead. Buinidh lìonaichean slige bunaiteach don t-seòrsa lìonadh seo. A thaobh a bhith a’ dèanamh cinnteach à dealachadh, thathas a’ moladh luchd-lìonaidh a thaghadh le farsaingeachd uachdar sònraichte beag dhaibhsan aig a bheil riatanasan èifeachd sgrùdaidh àrd. 2.6 Meud pore agus neart meacanaigeach
Tha meud pore, ris an canar cuideachd “pore volume”, a’ toirt iomradh air meud an tomhas falamh gach aonad aonad. Faodaidh e neart meacanaigeach an lìonadh a nochdadh gu math. Tha neart meacanaigeach luchd-lìonaidh le meud pore mòr beagan nas laige na neart luchd-lìonaidh le meud pore beag. Bidh lìonaichean le meud pore nas lugha na no co-ionann ri 1.5 mL / g air an cleachdadh sa mhòr-chuid airson dealachadh HPLC, agus bidh lìonaichean le meud pore nas motha na 1.5 mL / g air an cleachdadh sa mhòr-chuid airson cromatagrafaidheachd às-dùnadh moileciuil agus cromatagrafaidheachd le cuideam ìosal. 2.7 Ìre cuibhreachaidh
Faodaidh capadh na stùcan earbaill a tha air adhbhrachadh leis an eadar-obrachadh eadar todhar agus buidhnean silanol fosgailte a lughdachadh (leithid ceangal ionic eadar todhar alcaileach agus buidhnean silanol, feachdan van der Waals agus bannan hydrogen eadar todhar searbhagach agus buidhnean silanol), agus mar sin a’ leasachadh èifeachdas colbh agus cumadh stùc. . Bheir ìrean bannaichte gun chòmhdach taghadh eadar-dhealaichte an coimeas ri ìrean bannaichte le caiptean, gu sònraichte airson sampallan pòla.
- Farsaingeachd tagraidh diofar cholbhan cromatagrafaidheachd liùlach
Bheir a’ chaibideil seo cunntas air farsaingeachd tagraidh diofar sheòrsaichean de cholbhan cromatagrafaidheachd liùlach tro chuid de chùisean.
3.1 Colbh cromatagrafach ìre C18 air ais
Is e colbh C18 an colbh ìre cùil as cumanta a thathas a’ cleachdadh, a choinnicheas ri deuchainnean susbaint agus neo-chunbhalachd a’ mhòr-chuid de stuthan organach, agus a tha buntainneach ri stuthan meadhanach-polar, lag polar agus neo-polar. Bu chòir seòrsa agus sònrachadh colbh cromatagrafach C18 a thaghadh a rèir riatanasan dealachaidh sònraichte. Mar eisimpleir, airson stuthan le riatanasan dealachaidh àrd, bidh mion-chomharrachadh 5 μm * 4.6 mm * 250 mm gu tric air an cleachdadh; airson stuthan le matrices dealachaidh iom-fhillte agus polarity coltach ris, faodar mion-chomharrachadh 4 μm * 4.6 mm * 250 mm no meudan gràin nas lugha a chleachdadh. Mar eisimpleir, chleachd an t-ùghdar colbh 3 μm * 4.6 mm * 250 mm gus dà neo-chunbhalachd genotoxic a lorg ann an API celecoxib. Faodaidh sgaradh an dà stuth ruighinn 2.9, a tha sàr-mhath. A bharrachd air an sin, fon bhun-bheachd dèanamh cinnteach à dealachadh, ma tha feum air mion-sgrùdadh luath, bidh colbh goirid de 10 mm no 15 mm gu tric air a thaghadh. Mar eisimpleir, nuair a chleachd an t-ùghdar LC-MS/MS gus neo-chunbhalachd genotoxic a lorg ann an piperaquine phosphate API, chaidh colbh 3 μm * 2.1 mm * 100 mm a chleachdadh. B’ e 2.0 an sgaradh eadar an neo-chunbhalachd agus am prìomh phàirt, agus faodar lorg sampall a chrìochnachadh ann an 5 mionaidean. 3.2 Colbh phenyl ìre air ais
Tha colbh phenyl cuideachd na sheòrsa de cholbh ìre air ais. Tha roghainn làidir aig an seòrsa colbh seo airson todhar cùbhraidh. Ma tha freagairt todhar cùbhraidh air a thomhas le colbh àbhaisteach C18 lag, faodaidh tu beachdachadh air colbh phenyl a chuir na àite. Mar eisimpleir, nuair a bha mi a’ dèanamh celecoxib API, bha am prìomh fhreagairt air a thomhas le colbh phenyl an aon neach-dèanamh agus an aon shònrachadh (uile 5 μm * 4.6 mm * 250 mm) mu 7 tursan nas àirde na colbh C18. 3.3 Colbh ìre àbhaisteach
Mar leasachadh èifeachdach air colbh ìre cùil, tha colbh ìre àbhaisteach freagarrach airson todhar fìor phòla. Ma tha an stùc fhathast gu math luath nuair a bhios tu a’ slugadh le còrr air 90% ìre uisgeach anns a’ cholbh ìre air ais, agus eadhon faisg air agus a’ dol thairis air an stùc fuasglaidh, faodaidh tu beachdachadh air a’ cholbh ìre àbhaisteach a chuir na àite. Tha an seòrsa colbh seo a’ toirt a-steach colbh hilic, colbh amino, colbh cyano, msaa.
3.3.1 Colbh Hilic Mar as trice bidh colbh Hilic a’ fighe a-steach buidhnean hydrophilic anns an t-sreath alcyl bannaichte gus am freagairt do stuthan pòla a neartachadh. Tha an seòrsa colbh seo freagarrach airson mion-sgrùdadh stuthan siùcair. Chleachd an t-ùghdar an seòrsa colbh seo nuair a bha e a’ dèanamh susbaint agus stuthan co-cheangailte xylose agus na toraidhean aige. Faodaidh na isomers de derivative xylose a bhith air an sgaradh gu math cuideachd;
3.3.2 Colbh amino agus colbh cyano Tha colbh amino agus colbh cyano a’ toirt iomradh air toirt a-steach atharrachaidhean amino agus cyano aig deireadh an t-sèine alcyl bannaichte, fa leth, gus an roghainn airson stuthan sònraichte a leasachadh: mar eisimpleir, tha colbh amino na dheagh roghainn airson sgaradh siùcairean, amino-aigéid, bunaitean agus amides; Tha roghainn nas fheàrr aig colbh cyano nuair a bhios iad a’ sgaradh stuthan structarail hydrogenated agus neo-hydrogenated mar thoradh air bannan conjugated. Gu tric faodar colbh amino agus colbh cyano a thionndadh eadar colbh ìre àbhaisteach agus colbh ìre cùil, ach chan eilear a’ moladh atharrachadh tric. 3.4 Colbh Chiral
Tha colbh Chiral, mar a tha an t-ainm a’ moladh, freagarrach airson dealachadh agus mion-sgrùdadh choimeasgaidhean chiral, gu sònraichte ann an raon cungaidh-leigheis. Faodar beachdachadh air an t-seòrsa colbh seo nuair nach urrainn dha colbhan ìre cùil àbhaisteach agus ìre àbhaisteach sgaradh isomers a choileanadh. Mar eisimpleir, chleachd an t-ùghdar colbh chiral 5 μm * 4.6 mm * 250 mm gus an dà isomers de 1,2-diphenylethylenediamine a sgaradh: (1S, 2S) -1, 2-diphenylethylenediamine agus (1R, 2R) -1, 2 -diphenylethylenediamine, agus ràinig an sgaradh eadar an dà mu 2.0. Ach, tha colbhan chiral nas daoire na seòrsaichean colbhan eile, mar as trice 1W +/pìos. Ma tha feum air a leithid de cholbhan, feumaidh an aonad buidseat gu leòr a dhèanamh. Colbh iomlaid 3.5 Ion
Tha colbhan iomlaid ian freagarrach airson a bhith a’ dealachadh agus a’ sgrùdadh ionsan fo chasaid, leithid ianan, pròtanan, searbhagan niuclasach, agus cuid de stuthan siùcair. A rèir an seòrsa lìonaidh, tha iad air an roinn ann an colbhan iomlaid cation, colbhan iomlaid anion, agus colbhan iomlaid cation làidir.
Tha colbhan iomlaid cation a’ toirt a-steach colbhan stèidhichte air calcium agus hydrogen, a tha gu ìre mhòr freagarrach airson mion-sgrùdadh stuthan cationic leithid amino-aigéid. Mar eisimpleir, chleachd an t-ùghdar colbhan stèidhichte air calcium nuair a bha e a’ dèanamh anailis air calcium gluconate agus calcium acetate ann am fuasgladh sruthadh. Bha freagairtean làidir aig an dà stuth aig λ = 210nm, agus ràinig an ìre dealachaidh 3.0; chleachd an t-ùghdar colbhan stèidhichte air hydrogen nuair a bha e a’ dèanamh anailis air stuthan co-cheangailte ri glùcois. Bha cuid de phrìomh stuthan co-cheangailte - maltose, maltotriose agus fructose - le mothachadh àrd fo lorgairean eadar-dhealaichte, le crìoch lorgaidh cho ìosal ri 0.5 ppm agus ìre dealachaidh de 2.0-2.5.
Tha colbhan iomlaid anion gu ìre mhòr freagarrach airson mion-sgrùdadh stuthan anionic leithid searbhagan organach agus ions halogen; tha comas iomlaid ian nas àirde agus roghnachas aig colbhan iomlaid cation làidir, agus tha iad freagarrach airson dealachadh agus sgrùdadh sampallan iom-fhillte.
Chan eil anns na tha gu h-àrd ach ro-ràdh air na seòrsaichean agus na raointean tagraidh de ghrunn cholbhan cromatagrafaidheachd liùlach cumanta còmhla ri eòlas an ùghdair fhèin. Tha seòrsachan sònraichte eile de cholbhan cromatagrafach ann an tagraidhean fìor, leithid colbhan cromatagrafach mòr-pore, colbhan cromatagrafach beag-pore, colbhan cromatagrafaidheachd dàimh, colbhan cromatagrafach ioma-mhodh, colbhan cromatagrafaidheachd lionn àrd-choileanadh (UHPLC), colbhan cromatagrafaidheachd lionn supercritical (UHPLC). SFC), msaa Tha àite cudromach aca ann an diofar raointean. Bu chòir an seòrsa sònraichte de cholbh chromatagrafach a thaghadh a rèir structar agus feartan an t-sampall, riatanasan dealachaidh agus adhbharan eile.
Ùine a’ phuist: Jun-14-2024